Kinase Selectivity 프로파일링 서비스

프로메가의 Kinase selectivity 프로파일링 서비스를 통해 연구자들의 신약 개발 워크플로우를 가속화하세요. 처음부터 끝까지 프로메가 전문가들의 지원을 받을 수 있습니다. 프로메가는 협업적 접근 방식, 혁신적인 기술, 그리고 고품질 표준 관리로 고객의 성공을 위해 최선을 다하고 있습니다.

상담 시작하기 Download Overview PDF

서비스 개요

프로메가 분석 서비스

Kinase selectivity 프로파일링 서비스는 NanoBRET® Target Engagement Intracellular Kinase Assay를 사용하여 고객의 화합물을 분석하는 서비스입니다. 이 서비스는 HEK293 cell에 transient transfection된 192개 또는 300개의 full-length kinase로 구성된 패널을 사용합니다.

데이터

살아있는 세포 내에서의 화합물 affinity와 occupancy의 정량적 측정
Cellular selectivity 및 off-target activity 측정
낮은 에러율로 재현성 높은 ratiometric BRET 결과
Technical duplicate로 측정된 단일 농도 결과 및 dose response 데이터

서비스 일정

매월 진행하거나 또는 고객 요청에 따라 진행됨

소요 시간

2-3주

프로메가를 선택해야 하는 이유

신뢰성 높은 NanoBRET™ Target Engagement 기술

처음부터 끝까지 프로메가 전문가들과의 긴밀한 협업

Cellular assay로 생물학적으로 관련성 높은 결과 제공

기술 개요

How NanoBRET® Target Engagement Works

NanoBRET™ TE 기술은 bioluminescence resonance energy transfer (BRET) 방식을 사용하여 타겟 단백질과 화합물의 interaction을 확인할 수 있습니다. 타겟 단백질은 NanoLuc® luciferase와 fusion된 단백질 형태로 세포 내에서 발현시킵니다. BRET signal은 NanoLuc® luciferase의 발광 빛이 타겟-NanoLuc® fusion 단백질에 결합된 NanoBRET® TE tracer에 전달되어 생성됩니다. 세포막을 투과하는 테스트 화합물이 tracer와 경쟁적으로 타겟 단백질에 결합함에 따라 NanoBRET® signal은 감소하게 됩니다. 각 타겟에 대한 최적화된 실험 조건을 사용하여 세포 내 화합물의 affinity와 occupancy를 정량적으로 측정할 수 있습니다. 화합물 occupancy는 BRET signal을 normalization 할 수 있는 control을 사용해 정량화합니다.

Biochemical Kinase Assay 대비 Cellular Kinase Assay의 장점

Cellular kinase assay는 biochemical assay에 비해 실제 세포의 복잡성을 더 잘 반영하는 생리학적 환경을 제공합니다. 이는 약물의 permeability를 평가하고 세포 내의 환경에서 off-target 효과를 확인할 수 있습니다. Biochemical kinase assay는 정확하지만, 세포 내에서의 전반적인 interaction을 고려하지 못하기 때문에 kinase inhibitor를 평가하기 위한 더 통합적인 방법으로 cellular assay가 사용됩니다.

_{Cellular와 biochemical kinase assay의 비교 모식도

Left: Biochemical kinase assay는 kinase 타겟이 존재하는 간소화된 환경에서 수행됩니다. Right: Cellular kinase assay는 여러 단백질과 interaction이 존재하는 복잡한 세포 환경에서 진행되어 관련성 높은 데이터를 제공합니다.}

다양한 세포 내의 조건에 의해 occupancy 결과 그래프가 오른쪽 혹은 왼쪽으로 치우치게 됩니다.

단백질 complex
타겟 활성 상태
구획화(compartmentalization)
세포막
배출(efflux)
예측할 수 없는 대사산물(예. Nucleotide)

세포 내에서의 실험 방법으로 Kinase selectivity 프로파일 개선

이 dendrogram은 살아있는 세포에서 NanoBRET® TE K300 Kinase Panel을 사용하여 10μM dabrafenib의 타겟 occupancy를 cell-free biochemical 접근법과 비교한 결과를 보여줍니다. Occupancy가 50% 이상인 kinase는 빨간색 점으로 표시되어 있습니다. 실험 결과, dabrafenib은 biochemical 접근법을 사용했을 때 123개의 kinase와 결합한 반면, NanoBRET® TE 방법을 사용했을 때는 50개의 타겟에 결합하여 세포 내에서 더 선택적인 kinase 타겟 프로파일링을 나타냈습니다.

NanoBRET® TE: 50 Hits

Biochemical: 123 Hits

Kinase Panel

Kinome 전체에 걸쳐 광범위하게 퍼져 있는 kinase가 panel에 포함되어 있습니다. K192 (192개 full-length kinase)와 K300 (300개 full-length kinase) panel에 포함된 전체 kinase 리스트를 확인하시려면 아래를 클릭하세요.

Panel의 전체 kinase 리스트를 확인하시려면 클릭하세요.

AAK1	CDK14 + Cyclin Y	DCLK3	GSK3B	MAP3K7/TAB1	NEK9	PRKCH	STK26
ABL1	CDK15 + Cyclin Y	DDR1	HCK	MAP3K9	NIM1K	PRKCQ	STK3
ABL2	CDK16 + Cyclin Y	DDR2	HIPK2	MAP4K1	NLK	PRKG2	STK32A
ACVR1	CDK17 + Cyclin Y	DYRK1A	HIPK3	MAP4K2	NTRK1	PRKX	STK32B
ACVR1B	CDK18 + Cyclin Y	DYRK1B	HIPK4	MAP4K3	NTRK2	PTK2	STK33
ACVRL1	CDK19 + Cyclin C	DYRK2	HUNK	MAP4K5	NTRK3	PTK2B	STK35
ADK	CDK2 + Cyclin A1	DYRK3	ICK	MAPK1	NUAK1	PTK6	STK36
AKT1	CDK2 + Cyclin E1	EGFR	IGF1R	MAPK11	NUAK2	RET	STK38
AKT2	CDK20 + Cyclin H	EIF2AK4 k2 domain	IKBKE	MAPK14	PAK4	RIOK2	STK38L
ALK	CDK3 + Cyclin E1	EPHA1	INSR	MAPK15	PAK6	RIPK1	STK4
ARAF	CDK4 + Cyclin D3	EPHA10	IRAK1	MAPK3	PDPK1	RIPK2	TBK1
AURKA	CDK5 + CDK5R1	EPHA2	IRAK3	MAPK4	PHKG1	RIPK3	TEC
AURKB	CDK6 + Cyclin D1	EPHA3	IRAK4	MAPK6	PHKG2	ROCK1	TEK
AURKC	CDK7	EPHA4	ITK	MAPK8	PIK3C3	ROCK2	TESK1
AXL	CDK8 + Cyclin C	EPHA5	JAK2	MAPK9	PIK3CA + PIK3R1	RON	TGFBR1
BLK	CDK9 + Cyclin K	EPHA6	JAK2 (V617F)	MARK1	PIK3CB + PIK3R1	RPS6KA1	TGFBR2
BMP2K	CDKL1	EPHA7	JAK3	MARK2	PIK3CD + PIK3R1	RPS6KA2	TIE1
BMPR1A	CDKL2	EPHA8	JNK3	MARK3	PIKFYVE	RPS6KA3	TLK1
BMX	CDKL3	EPHB1	KIT	MARK4	PIM3	RPS6KA4	TLK2
BRAF (V600E)	CDKL5	EPHB2	LATS1	MAST3	PIP4K2C	RPS6KA6	TNK1
BRAF	CHEK1	EPHB3	LATS2	MAST4	PIP5K1B	RPS6KB1	TNK2
BRSK1	CHEK2	EPHB4	LCK	MELK	PKMYT1	SBK3	TNNI3K
BRSK2	CIT	ERN1	LIMK1	MERTK	PKN1	SGK1	TSSK1B
BTK	CLK1	ERN2	LIMK2	MET	PKN2	SGK2	TTK
CAMK1	CLK2	FER	LRRK2	MKNK2	PKN3	SGK3	TXK
CAMK1D	CLK4	FES	LTK	MLTK	PLK1	SIK1	TYK2
CAMK1G	COQ8B	FGFR1	LYN	MOK	PLK2	SIK2	TYRO3
CAMK2A	CRAF	FGFR2	MAP2K5	MUSK	PLK3	SIK3	ULK1
CAMK2B	CSF1R	FGFR3	MAP2K6	MYLK2	PLK4	SLK	ULK2
CAMK2D	CSK	FGFR4	MAP3K10	MYLK3	PRKAA1	SNRK	ULK3
CAMK2G	CSNK1A1L	FGR	MAP3K11	MYLK4	PRKAA2	SRC	VRK2
CASK	CSNK1D	FLT1	MAP3K12	NEK1	PRKACA	SRMS	WEE1
CDK1 + Cyclin B1	CSNK1E	FLT3	MAP3K13	NEK11	PRKACB	STK10	WEE2
CDK10 + Cyclin L2	CSNK1G2	FRK	MAP3K19	NEK2	PRKCA	STK11	YES1
CDK11A + Cyclin K	CSNK2A1	FYN	MAP3K2	NEK3	PRKCB	STK16
CDK11B + Cyclin B	CSNK2A2	GAK	MAP3K21	NEK4	PRKCD	STK17A
CDK12	DAPK2	GRK7	MAP3K3	NEK5	PRKCE	STK17B
CDK13	DCLK1	GSK3A	MAP3K4	NEK6	PRKCG	STK24

(click to expand)

Panel에서 관심 kinase를 찾을 수 없으신가요?
NanoBRET® TE Intracellular Kinase Assay에 사용할 수 있는 kinase vector의 전체 리스트은 Kinase Target Engagement Assay Selection Table에서 확인하실 수 있습니다. 추가적인 kinase를 찾고 계신다면 문의주세요.

이메일 문의하기

Kinase selectivity assay를 직접 진행하고자 하시나요?
한번의 실험에서 192개의 kinase panel에 대해 세포 내 화합물 occupancy를 정량적으로 분석할 수 있는 NanoBRET™ Target Engagement (TE) K192 Kinase Selectivity System을 제공합니다.

결과

화합물의 IC50 결정

프로메가의 서비스는 kinase hit에 대한 화합물 affinity를 결정하는데 도움을 드립니다. 아래 예시 데이터는 selectivity 프로파일링 데이터로부터 확인된 개별 kinase에 대한 IC50 kinase 프로파일을 보여줍니다.

_{156nM dabrafenib에 대한 selectivity 프로파일은 NanoBRET® TE K300 Kinase Selectivity Panel을 사용하여 얻었습니다. Kinase에 대한 dabrafenib의 affinity를 확인하기 위해 dabrafenib K300 프로파일에서 확인된 9개의 kinase hit 각각에 대한 개별 NanoBRET® TE Kinase Assay를 진행한 결과입니다.}

Explore another example:

Case Study