Luciferase Reporter Assay 선택
Reporter assay 비교 가이드
Reporter Gene과 Assay Chemistry
Luciferase reporter assay 디자인 시에는 두 가지 중요한 요소를 고려해야 합니다. 이는 luciferase reporter 단백질 자체와 reporter activity를 측정하는데 사용되는 assay chemistry이며 이 두 가지는 assay의 전체 결과에 영향을 줍니다. 실험 목적에 적합한 reporter/detection 시약을 선택함으로써 연구에 가장 적합한 solution을 만들 수 있는 luciferase reporter assay로 customization할 수 있습니다.
프로메가는 크기, 밝기 및 단백질 half-life가 다른 NanoLuc® luciferase (Nluc, 19kDa), Renilla luciferase (Rluc, 36kDa), Firefly luciferase (Fluc, 61kDa)의 세 가지 luciferase 중에서 선택할 수 있도록 제공하고 있습니다.
Detection Reagent 선택 시 고려 사항
각각의 luciferase reporter에 사용 가능한 여러 가지의 assay detection reagent가 있습니다. 최적의 assay reagent를 선택하기 위해 아래의 사항들을 고려해야 합니다.
- 분석에 필요한 signal intensity 및 전체 검출 범위(dynamic range)
- 실험 processing workflow에 영향을 주는 signal 안정도(stability) 혹은 반감기(half-life)
- 샘플 처리 단계 여부: non-homogenous assay는 reagent 첨가 전에 lysate를 만들기 위해 별도 단계가 필요하나 homogenous assay는 시료 전처리 과정이 필요 없이 배양하는 세포에 직접 처리 가능합니다.
- Lytic 혹은 live-cell reporter 측정
- Single 혹은 dual-reporter 측정
Luciferase Signal 강도와 안정도
Luciferase Assay 특성 비교
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| Luciferase Detected | Assay Reagent | Ideal For | Signal Half-Life | Sensitivity | Number of Steps | Live Cell Assay? | Injectors Needed? |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| NanoLuc, Firefly | Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter Assay System (NanoDLR) | Primary reporter를 선택할 수 있는 homogenous Fluc/Nluc dual-reporter detection 시약임, 안정적인 signal이 필요한 경우 두 reporter 모두 가장 높은 감도를 제공하며 Nluc을 primary reporter로 사용하는 경우 가장 높은 감도를 제공함, 두 개의 primary reporter 또는 internal control이 필요한 경우 적거나 많은 샘플 처리 시에 이상적임 | 2 hours each | +++++ (Nluc) ++ (Fluc) |
2 (lysate optional) | No | Optional |
| Firefly, Renilla |
Dual-Luciferase® Reporter Assay System (DLR) | Non-homogenous Fluc/Rluc dual-reporter detection 시약임, Lysate을 준비하는 별도 단계가 필요하며 시약을 첨가하기 위해 2개의 injector가 필요함, 최대 Fluc 감도와 internal control이 필요한 경우 적은 샘플 처리 시에 이상적임 | 10 minutes, 2 minutes | ++++ (Fluc) ++++ (Rluc) |
3 | No | Yes 2 injectors |
| Firefly, Renilla |
Dual-Glo® Luciferase Assay System | 감도가 감소된 signal이 안정적인 homogenous Fluc/Rluc dual-reporter detection 시약임, Rluc을 internal control로 사용하는 경우 Fluc reporter를 이용한 high-throughput 처리 시에 이상적임 | 2 hours each | + (Fluc/Rluc) |
2 | No | No |
| NanoLuc | Nano-Glo® Luciferase Assay System | 밝고 안정적인 signal을 생성하는 homogenous Nluc detection 시약임, 높은 민감도가 필요한 경우 적거나 혹은 많은 양의 샘플 처리에 이상적임 | 2 hours | +++++ | 1 | No, unless used with secNluc | No |
| NanoLuc | Nano-Glo® Live Cell Assay System | 살아있는 세포에서 측정 가능한 가장 밝은 Nluc detection 시약임, Non-lytic assay에서 높은 감도가 필요한 경우 single timepoint 분석에 이상적임 | Up to 2 hours | ++++ | 1 | Yes | No |
| NanoLuc | Nano-Glo® Vivizine™ Live Cell Substrate | 살아있는 세포에서 측정 가능한 중간 정도의 밝기와 안정성을 가지는 Nluc detection 시약임, 장시간동안 지속적인 kinetic 분석에 이상적임 | Up to 24 hours | +++ | 1 | Yes | No |
| NanoLuc | Nano-Glo® Endurazine™ Live Cell Substrate | 살아있는 세포에서 측정 가능한 가장 안정적인 signal을 생성되는 Nluc detection 시약임, 수일 간의 지속적인 kinetic 분석에 이상적임 | Up to 72 hours | ++ | 1 | Yes | No |
| Firefly | Luciferase Assay System | Lysate를 별도로 만들고 injector로 시약 첨가가 필요한 non-homogenous Fluc detection 시약임, Fluc 높은 감도가 필요한 경우 적은 샘플 처리 시에 이상적임 | 10 minutes | ++++ | 2 | No | Yes |
| Firefly | Bright-Glo® Luciferase Assay System | 가장 밝고 가장 짧은 signal half-life를 제공하는 homogenous Fluc detection 시약임, 높은 감도가 필요한 경우 많은 샘플 처리 시에 이상적임 | 30 minutes | +++ | 1 | No | No |
| Firefly | ONE-Glo™ Luciferase Assay System | 중간 정도의 밝기와 signal half-life를 제공하는 homogenous Fluc detection 시약임, High- 혹은 ultrahigh-throughput 처리 시에 이상적임 | 45 minutes | ++ | 1 | No | No |
| Firefly | ONE-Glo™ Ex Luciferase Assay System | 중간 정도의 밝기, signal half-life, 시약의 안정도가 향상된 homogenous Fluc detection 시약임, high- 혹은 ultrahigh-throughput 처리 시에 이상적임, 또한 NanoLDLR의 Fluc detection 시약으로 single과 dual assay 시에 같이 사용 가능함 | 2 hours | ++ | 1 | No | No |
| Firefly | Steady-Glo® Luciferase Assay System | 최대의 signal 안정도와 낮은 signal intensity를 제공하는 homogenous Fluc detection 시약임, High- 혹은 ultrahigh-throughput 처리 시에 이상적임 | 5 hours | + | 1 | No | No |
| Renilla | Renilla Luciferase Assay System | Lysate 별도로 만들고 injector로 시약 첨가가 필요한 non-homogenous Rluc detection 시약임, 높은 감도의 Rluc 측정이 필요한 경우 적은 샘플 처리 시에 이상적임 | 2 minutes | ++++ | 2 | No | Yes |
| Renilla | Renilla-Glo Luciferase Assay System | Signal 안정도가 증가된 homogenous Rluc detection 시약임, 많은 샘플 처리 시에 이상적임 | 40+ minutes | ++ | 1 | No | No |
| Renilla | ViviRen™ Live Cell Substrate | 살아있는 세포에서 최고의 감도로 측정 가능한 Rluc detection 시약임, 감도 높은 실험의 경우 짧은 non-lytic assay 혹은 single timepoint 분석에 이상적임 | 10 minutes | +++ | 1 | Yes | No |
| Renilla | EnduRen™ Live Cell Substrate | 최고의 signal 안정도를 제공하는 살아있는 세포에서 측정 가능한 Rluc detection 시약임, Extended kinetic 분석에 이상적임 | Up to 24 hours | + | 1 | Yes | No |
Bioluminescent Reporter Assay Design에 대해 자세히 알아보기
두 개의 시리즈로 구성된 해당 가이드에서 먼저 최적의 reporter를 선택하기 위한 기본 고려 사항을 살펴보았습니다. 두번째 “Assay Normalization Options”에서는 실험 디자인, 결과 분석 방법에 대해 알아보고자 합니다.
Related Resources
Guide: Reporter Genes and their Applications
Webinar: Understanding Reporter Assay Design
Blog: Tips for Performing Dual-Reporter Assays