Luciferase Assay Workflow
1990년에 프로메가가 새로운 reporter 기술로 firefly luciferase 사용을 처음 언급한 것을 알고 계시나요?
이후 30여년 동안, 프로메가는 luciferase 기술을 지속적으로 개선하고 확장해왔습니다.
Firefly luciferase뿐만 아니라 NanoLuc® luciferase를 이용한 luciferase reporter gene assay에 대해 자세히 알아보세요.
Luciferase Reporter Gene Assay
Luciferase reporter gene assay는 luciferase의 발광 신호를 통해 유전자의 발현을 민감하게 측정하는 강력한 실험 방법입니다. 이 방법은 luciferase vector를 세포에 transfection하여 신호 전달 경로의 활성화에 따른 유전자 발현 변화를 모니터링하여 세포 내 신호 전달 현상을 쉽게 해석할 수 있습니다. 프로메가의 Luciferase assay를 위한 detection 시약, vector, transfection 시약까지 한 번에 알아보세요.
Luciferase Reporter Vector
프로메가는 크기, 밝기 및 단백질 반감기가 다른 NanoLuc® luciferase (Nluc, 19kDa), Firefly luciferase (Fluc, 61kDa), Renilla luciferase (Rluc, 36kDa)의 세 가지 luciferase 중에서 선택할 수 있도록 제공하고 있습니다. Signaling pathway 분석에 최적화된 Pre-designed Rapid Response Luciferase Vector부터 원하는 타겟을 클로닝 할 수 있는 MCS vector까지 아래의 리스트에서 만나보세요.
Transfection 시약
Luciferase assay의 성공을 위해서는 높은 transfection 효율, 낮은 세포 독성, 그리고 높은 단백질 발현이 필수적입니다. 프로메가의 transfection 시약은 일반적인 세포뿐만 아니라 transfection이 어려운 세포에서도 효율적으로 vector를 도입합니다. 다양한 조건에서도 높은 세포 생존율과 재현성을 제공하며, luciferase gene 발현을 극대화하여 정확한 분석 결과를 도출할 수 있습니다. 프로메가의 transfection 시약에 대해 더 알아보세요.
FuGENE® Transfection Reagent
Transfection이 어려운 세포에서도 높은 발현 효율과 낮은 세포 독성을 자랑하는 FuGENE® 시리즈 입니다.
FuGENE® 4K Transfection Reagent
고급 응용 분야에서 사용할 수 있도록 디자인된 ‘Advanced Transfection Reagent’
- 까다로운 세포주와 일반적인 세포주 모두에서 높은 발현 효율
- 낮은 세포 독성으로 artifact 최소화
- Animal-free 시약으로 단백질 및 바이러스 생산 등 고급 응용 분야에 최적화
FuGENE® HD Transfection Reagent
Transfection이 어려운 세포주에 적용할 수 있는 ‘High-quality Transfection Reagent’
- 암 모델 세포주, 줄기 세포, 곤충 세포 등 transfection이 어려운 세포주에서 높은 발현 효율
- 배양 배지 제거 과정이 필요 없는 간단한 프로토콜
- 낮은 세포 독성으로 artifact 최소화
FuGENE® 6 Transfection Reagent
일반적으로 사용하는 세포주에 적합한 ‘Reliable Transfection Reagent’
- 일반적인 다양한 세포주에서 높은 발현 효율
- 낮은 세포 독성으로 artifact 최소화
- 배양 배지 제거 과정이 필요 없는 간단한 프로토콜
Luciferase Detection 시약
Reporter gene assay의 detection reagent를 선택할 때 고려해야 할 두 가지 요소는 luciferase reporter 단백질과 reporter activity를 측정하는데 사용하는 assay chemistry입니다. Luciferase 종류에 따라 다양한 detection reagent를 제공하고 있으며 이는 signal 강도, signal 반감기, 실험 방법에 따라 선택할 수 있습니다. Flash 타입의 시약은 lysate를 별도의 단계를 통해 준비해야 하며, signal이 강하지만 signal 반감기가 짧아 재현성 높은 결과를 얻기 위해서는 시약 injector 사용을 권장합니다. Glow 타입의 시약은 lysate를 별도로 준비할 필요 없이 세포에 직접 시약을 처리하여 간편하게 실험할 수 있으며, flash 타입의 시약보다 signal은 약하지만 signal 반감기가 길어 한번에 많은 샘플을 처리할 때 유용합니다. 실험 디자인에 따른 최적의 reporter assay 시약을 확인해보세요.
Single Luciferase Assay
| Luciferase | Assay Reagent | Signal 타입 | Live cell Assay |
|---|---|---|---|
| Firefly | ONE-Glo™ Luciferase Assay System | Glow | X |
| ONE-Glo™ EX Luciferase Assay System | Glow | X | |
| Bright-Glo™ Luciferase Assay System | Glow | X | |
| Steady-Glo® Luciferase Assay System | Glow | X | |
| Luciferase Assay System | Flash | X | |
| NanoLuc® | Nano-Glo® Luciferase Assay System | Glow | X |
| Nano-Glo® Live Cell Assay System | Glow | O | |
| Nano-Glo® Vivazine® Live Cell Substrate | Glow | O | |
| Nano-Glo® Endurazine™ Live Cell Substrate | Glow | O | |
| Renilla | Renilla-Glo Luciferase Assay System | Glow | X |
| Renilla Luciferase Assay System | Flash | X |
Dual Luciferase Assay
| Luciferase | Assay Reagent | Signal 타입 | Live cell Assay |
|---|---|---|---|
| Firefly + Renilla | Dual-Glo® Luciferase Assay System | Glow | X |
| Dual-Luciferase® Reporter Assay System | Flash | X | |
| Firefly + NanoLuc® | Nano-Glo® Dual-Luciferase Reporter Assay System | Glow | X |
Single Luciferase Assay
Single luciferase assay는 하나의 luciferase를 사용하여 타겟 유전자의 발현을 측정하는 방법입니다. 실험 디자인에 따라 다양한 detection reagent를 선택할 수 있으며, 이를 통해 정확도와 민감도를 최적화할 수 있습니다.
NanoLuc® 과 firefly luciferase assay 시스템의 신호 강도와 안정성을 비교한 그래프입니다. Nano-Glo® Luciferase Assay System은 매우 높은 신호 강도와 2시간 이상의 안정적인 신호 지속성을 보여주며, 다른 시스템에 비해 최대 100배 밝은 신호를 나타냅니다. Firefly luciferase assay 시약인 Luciferase Assay Reagent, One-Glo™, Bright-Glo™, Steady-Glo™ Luciferase Assay 시스템은 신호 강도와 유지 시간이 다르게 나타납니다.
Dual Luciferase Assay
Dual Luciferase Assay는 transfection 효율, 세포 개수 등의 실험 변수를 control luciferase로 normalization하여 타겟 유전자 발현을 정확하게 측정할 수 있는 reporter assay입니다.
실험 reporter vector와 함께 co-transfection된 control reporter vector의 발현을 측정하여 실험 결과를 normalization 합니다. 두 reporter의 발광 신호를 순차적으로 측정하고, 각 well에서 "실험 reporter 활성 / 컨트롤 reporter 활성"의 비율을 계산하여 normalize된 값을 얻습니다. 이 방법은 transfection 효율, 세포 수, 생존 세포 수 등 실험 조건에 따른 차이를 보정하는 데 유용합니다.
관련자료
Luciferase reporter assay에 대한 더 많은 내용을 알고 싶으신가요?
아래의 여러 가이드를 통해 assay에 대한 기본적인 내용부터 심화된 내용 뿐만 아니라 실험 최적화를 위한 다양한 팁들도 확인해보세요.